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相差顯微鏡觀察方法介紹

更新時間:2017-06-09瀏覽:1138次

在顯微鏡的發(fā)展過程中,相差鏡觀察法的發(fā)明是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就。我們知道,人眼只能區(qū)分光波的波長(顏色)和振幅(亮度)。對于無色透明的生物標本,當光線通過時,波長和振幅變化不大,在明場觀察時很難觀察到標本。

相差顯微鏡利用被觀察物體的光程差值進行觀察,也就是利用光的干涉現(xiàn)象,將人眼不可分辨的相差變?yōu)榭煞直娴恼穹睿词篃o色透明的物質(zhì)也可以清晰可見。這大大便利了活體細胞的觀察,因此相差鏡觀察廣泛應用于倒置顯微鏡中。

相差顯微鏡的基本原理是把透過標本的可見光的光程差變成振幅差,從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度,使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。光線透過標本后發(fā)生折射,偏離了原來的光路,同時被延遲了1/4λ(波長),如果再增加或減少1/4λ,則光程差變?yōu)?/span>1/2λ,兩束光合軸后干涉加強,振幅增大或者減少,提高反差。在結(jié)構(gòu)上,相差顯微鏡又不同于普通光學顯微鏡,具有兩個特殊之處:

  1. 環(huán)形光闌(annular diaphragm)位于光源與聚光器之間,作用是透過聚光器的光線形成空心光錐,集聚到標本上。
  2. 相位板(annular phaseplate)在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板,可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ,分為兩種:

     ?A+相板:將直射光推遲1/4λ,兩組光波和軸后光波相加,振幅加大,標本結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加明亮,形成亮反差(或稱負反差)。

     ?B+相板:將衍射光推遲1/4λ,兩組光波和軸后光波相減,振幅變小,形成暗反差(或稱正反差),結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更暗。

 

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